Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。
由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。
用途： 包括用双脱氧末端终止法进行 DNA 序列分析、 用于 cDNA 第二链的合成、 在定点突变中用于合成第二链、 用引物延伸法(primer extension) 制备单链 DNA 探针等。
功能
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一个片段，只有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，失去了5’→3’外切酶活性。它可用于填补DNA单链末端成为双链。
如果供给32P标记的三磷酸核苷酸，则可使DNA带上同位素标记。当用交错切割的限制酶切成带有单链粘性末端的DNA片段，要用被切成平头末端的DNA片段连接时，可以先用Klenow片段使粘性末端的单链补齐成为平头，然后在DNA连接酶作用下把两个DNA片段连接起来。
以上内容参考：百度百科-Klenow片段