构建芙囹买乐载体时,转化过后不长菌的原因:转化的时候有误,可以重新实验。目的基因和载体都切开,特别是目的基因如磨营稼刻果是PCR后直接酶切效率会较低;载体上两个酶切位点连在一起,感受态的效率问题,转化过程对不对,如抗生素加的对不对。
如果没有弄错,那就需要改动连接体系,载体和片段的数量比在1:5-1:10之间,片段越小就多加点。还有一个就是感受态效率,做连接的感受态效率要在10^6以上。想想操作过程当中有没有错误,有时候涂板的耙子温度太高了,菌液离酒精灯太近了,都会烫死细菌的。
质粒对宿主生存并不是必需的
这点不同于线粒体,线粒体DNA也是环状双链分子,也有独立复制的调控,但线粒体的功能是细胞生存所必需的。线粒体是细胞的一部分,质粒也往往有其表型,其表现不是宿主生存所必需的,但也不妨碍宿主的生存。
某些质粒携带的基因功能有利于宿主细胞的特定条件下生存,例如,细菌中许多天然的质粒带有抗药性基因,如编码合成能分解破坏四环素、氯霉素、氨芐表霉素等的酶基因,这种质粒称为抗药性质粒,又称R质粒,带有R质粒的细菌就能在相应的抗生素存在生存繁殖。