从大肠杆菌中提取RNA的具体过程

时间:2024-10-12 03:50:29

1、首先,将含有重组子的菌株接种于2ml含Kan的LB培养液中,并在37摄氏度下进行振荡培养过夜。

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2、然后,用2%的接种量分别接种于两支5ml含Kam的LB培养液,放置于37摄氏度下进行振荡培养两个小时,知道OD值为0.4-0.6.

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3、然后,在其中的一支中加入15-50微升的100mmol/LIPTG,另一支未加诱导剂作为对照,继续 在30摄氏度下振荡培养三小时。

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4、然后,取下菌液,放入冰水 中,开始进行RNA的提取,各取菌液1.5ml,在4摄孩器绩融氏度,8000r/min下离心五分钟,小心倒掉上清液,并以伟江移液器尽量吸掉残留的液体。

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5、然后,各加入250微升原生质体缓冲液,以移液器将菌体充分悬浮,再各加入500微升原生质体缓冲液与6微升的50mg/ml溶菌酶,混合均匀后,置于冰浴中十五分钟。

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6、然后,在4摄氏度下以7000r/min离心五分钟,小心倒掉上清液,并以移液器尽量吸掉残留液体,再各加入38微升裂解缓冲液,以移液器将管底大肠杆菌原生质体充分悬浮。

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7、最后,各加入1.2微升DEPC,以手指轻弹管壁使充分混合,并离心数秒后,在放置于37摄氏度下五分钟。

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