1、Edman降解(Edman degradat坡纠课柩ion),从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残断芡闽彝基被异硫氰酸苯酯修饰,然后从多肽链上切下修饰的残基(此残基就是直接与PITC相连接的氨基酸),再经层析鉴定,余下的多肽链(少了一个残基)被回收再进行下一轮降解循环。
2、所以如果FITC直接修饰在N端氨基的时候,在切割过程中时候发生Edman degradation反应,如下图。
3、为了避免这个副反应的发生,我们在N端标记的时候一定要加一个linke,如2-氨基乙酸,3-氨基丙酸,6-氨基己酸,目前我们常用的是6-氨基己酸,因为较长的碳链可以降低对活性中心的影响,同时又能很好的与FITC反应。所以赖氨酸侧链修饰FITC,我们可以不用加linker。
4、例如有一个肽段序列为 FSGDCK,三字母为Phe-Ser-Gly-Asp-Cys-Lys。
5、一、在N端标记FITC,选用最常用的6-氨基己酸为Linker,其结构为
6、二、在C端K的侧链标记FITC,可以选择不添加Linker,其结构为