1、在显微镜下观察细胞,当细胞融合度达到90%,即可传代。
2、在超净台/安全柜中,吸掉原有培养基,加入PBS溶液清洗一次,加入Xeno-Free扭箧别砷细胞消化液(AC-1001024/1001025)使之完全覆盖皿/瓶底。
3、室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
4、加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基,用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。
5、将细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心3 min。
6、弃上清,加入人间充质干细胞培养基,重悬细胞,计数。1:3-1:4比例传代,或按1-2x104 cells/cm2 传代,均匀铺在培养皿/瓶中,置于37℃,5%CO2 培养箱中培养。