1试验勤崞擒啶材料
试验于山东农业大学园艺科学与工程学院中心实验室、花卉栽迪舻闽裆培生理实验室以及山东农业大学南校区园艺站进行。供试材料为栽植3年的美国红枫（Acerpalmatum）。
1.1试验设计
1.1美国红枫叶片色素成分分离鉴定及花色素苷的稳定性
2009年5月，选晴天上午9:00~10:00采集枝条中部叶片，采后立即放入冰盒保存。用自来水冲洗叶片3~4次，然后用蒸馏水冲洗，晾干；去叶柄及叶脉后剪碎混匀，备用。
1.2温光互作对美国红枫叶片荧光参数和抗氧化酶活性的影响
于2009年4月取长势一致，生长健壮的美国红枫枝条，用蒸馏水冲洗干净，放入装有hogland营养液的水桶中，每桶放10支，每处理3次重复，共15桶。分别放入不同温度和光照的光照培养箱中：高温强光（I）：35℃和1200μmol·m-2·s-1；低温强光（II）：10℃和1200μmol·m-2·s-1；低温弱光（III）：10℃和100μmol·m-2·s-1；高温弱光（IV）：35℃和100μmol·m-2·s-1。
1.3高温强光下缓冲溶液及Fe
2+溶液对美国红枫叶片光合作用及叶片内抗氧化酶活性的影响
2009年8月选株高及生长状况大致相同，生长健壮的植株将此次试验分为四组：
T1对照（喷施蒸馏水）；
T2叶面喷施pH5.4缓冲溶液；
T3叶面喷施铁肥（10mmol/L）；
T4叶面喷施pH5.4缓冲溶液与Fe2+（10mmol·L-1）溶液；
每天傍晚喷施一次，溶液均匀喷洒于叶片正、背面，以形成可见的液珠为度。处理2d后开始取材，此后每天取材一次，连续6次。
2测定内容与方法
2.1叶片色素成分定性测定
美国红枫叶片色素类型的定性分析：取叶片（幼叶）0.1g，分别加石油醚、10%HCl、30%氨水约5ml，迅速研磨成匀浆，过滤，观察颜色。
美国红枫叶片类黄酮显色反应：
（1）浓盐酸--镁粉反应：加入镁粉少量，然后加入浓盐酸5滴，摇匀，静置1h；
（2）浓盐酸--锌粉反应：加入锌粉少量，然后加入浓盐酸10滴，摇匀，静置1h；
（3）醋酸铅反应：加2.0%Pb（CH3COO）·3H2O2ml，摇匀，静置2h；
（4）三氯化铁反应：加5.0%FeCl3·6H2O2ml；
（5）三氯化铝反应：加2.0%AlCl3·6H2O甲醇溶液1ml；
（6）浓硫酸反应：加2.5ml浓H2SO4，摇匀，再置沸水浴5min；
（7）碱性试剂反应：加5%Na2CO33ml，摇匀，密闭静置30min，通空气10min；
（8）氨性氯化锶反应：取甲醇10ml，加氨水定容至25ml，成为被氨水饱和的甲醇溶液；对样品液加0.01mol/LSrCl2·6H2O甲醇液10滴，再加被氨水饱和的甲醇液10滴，摇匀，静置1h；
（9）硼酸反应：加2.0%H2O2C4·2H2O10滴，再加2.0%H3BO33ml。
2.2花色素苷、叶绿素含量测定
花色素苷将叶片洗净，擦干，剪碎。用2.5mol/LHCl：95%乙醇=15：85（V/V）混合液，在黑暗条件下浸提24h后用岛津UV-2450紫外可见分光光度计检测535nm波长的光密度值，按公式（胡位荣等，2004）计算花色素苷的含量。叶绿素采用80%丙酮提取，比色法测定（赵世杰，1998）：取新鲜叶片，避开大叶脉，用面积为13.25px2的打孔器打取叶圆片10个，加80%丙酮20ml，置于暗处浸提24~48h，直到叶片发白，于663nm、646nm、470nm下比色，按公式计算Chla、Chlb和Car含量。
2.3 PAL酶活性测定
根据张春妮等（2005）的方法有所改动。酶液的制备：称取0.3g叶片，加入0.05gPVP，再加0.2mol·L-1硼酸缓冲液（pH8.8）5ml，冰浴中研磨匀浆，在4℃下1000r·min-1，离心15min，上清液用作酶活性测定。酶活性测定：取1ml0.02mol·L-1苯丙氨酸，加入2ml0.05mol·L-1硼酸盐缓冲液（pH8.8）和0.5ml酶提取液，对照用0.5ml0.2mol·L-1硼酸盐缓冲液（PH8.8）代替酶提取液。于30℃水浴保温30min，用U-1800紫外分光光度计测定290nm处的吸光度，酶活性单位定义为每克鲜重每小时吸光度的变化（△AOD290·h-l·g-1FW）。
2.4净光合速率测定
选择并标记植株上完好的功能叶，用Ciras-1型便携式光合仪（英国）直接测定净光合速率（Pn）。
2.5荧光参数测定
用FMS-2型调制式荧光仪（英国Hansatech产）测定各项荧光参数，测定叶片的部位与光合作用的测定部位相同，测定前先暗适应30min，测定时调整叶片使其受光量尽量一致，以减少误差。测定暗适应下最大荧光（Fm）、可变荧光（Fv）、初始荧光（Fo）。各参数的意义及光化学效率计算参照Demming-Adams等（1992）及FMS-2型叶绿素荧光仪使用手册，公式如下：PSⅡ最大光化学效率（Fv/Fm）=（Fm-Fo）/Fm。
2.6叶黄素循环测定
用打孔器取2个叶圆片（50px2），用高效液相色谱仪按照Cheng（2003）的方法分析测定叶黄素循环各组分紫黄质（V）、单环氧玉米黄质（A）、玉米黄质（Z）含量以（A+Z）/（A+Z+V）表示脱环氧化状态。各项指标的测定均重复5次。测定处理0、5d的叶黄素循环的变化情况。
2.7 SOD、POD、CAT活性，MDA和可溶性蛋白含量的测定
称取叶片0.5g，于研钵中加5mlpH7.8的50mmol·L-1磷酸缓冲液，冰浴研磨，0～4℃下10000rpm离心15min，上清夜即为酶提取液。供酶活性、MDA含量和可溶性蛋白含量测定。SOD活性用NBT还原法（Giannopolitis，1977）：3ml反应液（内含2.7ml144mmol·l-1的蛋氨酸，0.1ml22.5μmol·L-1氮蓝四唑，0.1ml3μmol·L-1的EDTA-Na2，0.1ml60μmol·L-1的核黄素）加入20μL酶提取液，60μmol·m-2·s-1左右光照下反应30min，于560nm比色，以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位。
POD活性采用愈创木酚法（Omran，1980）：3ml反应液（其中H2O2的浓度为0.1mol·L-1，愈创木酚浓度为3.5mmol·L-1，用0.1mol·L-1pH6.0的磷酸缓冲液配制）中加入20μl酶提取液，紫外分光光度计马上读OD470值，每隔一分钟读一次，读反应前2min的OD值，活性△OD470·min-1·g-1FW表示。CAT活性用Chance等方法测定（Chance等，1995），3ml反应液（0.01mol·L-1pH7.0的磷酸缓冲液20ml中加入0.1mol·L-1的H2O25ml）中加入100μL酶液，立即读取OD240值，每隔1min读一次，读反应前2min的OD值，活性以△OD240·min-1·g-1FW表示。
MDA含量测定用硫代巴比妥酸法（赵世杰等，1998）：取酶提取液1ml，加2ml0.67%的TBA溶液，沸水浴15min，4000rpm离心20min，于600nm，532nm，450nm下比色。MDA含量以μmol·g-1FW表示。可溶性蛋白含量的测定采用考马斯亮蓝比色法（赵世杰，1998）。取上清液20μL（对照加20μL水），加3ml考马斯亮蓝（100mg考马斯亮蓝，溶于50ml95%的乙醇，加85%的磷酸100ml，定溶至1000ml），放置2min马上于595nm下比色。可溶性蛋白含量以mg·g-1FW表示。2.8可溶性糖含量的测定可溶性糖的测定采用蒽酮比色法。0.3g鲜样加10ml蒸馏水，封口沸水浴30min（2次），滤纸漏斗过滤入50ml容量瓶中，冲洗残渣，定容。吸提取液1ml，加蒸馏水1ml（对照加2ml蒸馏水），加蒽酮乙酸乙酯液（称1g蒽酮溶于50ml乙酸乙酯中）0.5ml，加浓硫酸5ml，振荡，沸水浴1min，自然冷却后，于630nm下比色（李合生等，2001）。
3数据与分析
采用Excel软件处理数据、制图，采用DPS软件进行相关性分析。