1、抗原的免疫方案根据其性质不同而异。本文以制备兔抗人补体C3抗血清为例。
2、(1)抗原乳化:称取羊毛脂10g于研钵中,、逐滴加入石腊油40ml,逐滴研磨,高压灭菌后备用。将上述不完全福氏碍瘼挝琉佐剂预热至60℃,取3ml,逐滴加入0.5ml BCG(75mg/ml),继续加入2.5ml人C3蛋白(2.4mg/ml),边滴入边研磨,直至达到“油包水”状态。
3、(2)动物免疫:选取健康新西兰兔(3Kg左右),消毒局部皮肤,用1ml注射器吸取1ml乳化抗原,于兔每只脚掌皮下注入0.5ml。间隔2周后,将1ml乳化抗原多点(5-10点)注入兔腘窝及背部皮下。间隔2周后,在1周内分别3次通过兔耳静脉注射2.4mg/ml人C3蛋白液(分别为0.1ml、0.3ml、0.5ml),间隔1周后采用双向免疫扩散测定抗血清效价,当效价达到1:16以上即可放血。
4、(3)放血:可采用颈动脉放血法和心脏采血法。
5、(4)鉴定:采用双向免疫扩散或ELISA测定抗血清效价。
6、(5)保存:抗血清收获后,加1/万硫柳汞或1/万的叠氮钠防腐,或加入等量的中性甘油,分装小瓶,置-20℃以下的低温保存,数月至数年内抗体效价无明显变化。注意避免反复冻融。也可将抗血清冷冻干燥后保存。