1、首先,去保存于-80摄氏度的含原核表达质粒的表达工程菌BL21(DE3)100微升分别加入10ml加Kan的培养液中,在37摄氏度250r/min下振荡培养过夜。
2、然后,加入1%量接种至1L的BL培养基中,在37摄氏度振荡培养至OD600为0.5-0.6大约为3-4小时。
3、然后,加入IPTG,在37摄氏度200r/min下振荡培养4-6小时,用12000g离心菌体,用60ml冰冷的STE悬浮,离心够菌体保存-20摄氏度下冰箱中备用。
4、然后,菌体用60ml的冰冷的STE悬浮,用种终质量浓度为100微克每毫升的溶菌酶,在冰浴条件下处理十五分钟,然后添加终质量为5mmol/L的DTT。
5、然后,将样品分成六份10ml平行样,分别添加终质量浓度为0、0.25%、0.5%、1%、2%以及4%的肌氨酰,然后进行超声波破碎。
6、最后,样品10000g离心二十五分钟,回收上清液,沉淀用STE悬浮,进行SDS-PAGE分析,选择包含体最大溶解性的最低的肌氨酰质量浓度。