1、染毒:CP(环磷酰胺)腹腔注射(100mg/kg)一次
2、细胞周期同步化:处死前2-3小时腹腔注射秋水仙碱400mg/L,4mg/kg
3、取样:双侧股骨→PBS(pH6.8)5ml冲洗骨髓腔→离心1500rpm/min离心十分钟→弃上清
4、低渗:0.075M KCl6ml,37°c孵育15分钟→加入固定液1ml预固定1分钟→离心1000rpm/min十分钟,弃上清
5、固定:固定液4ml,37°c孵育20分钟→离心十分钟(1000rpm/min),弃上清。重复一次步骤5.
6、制片:试管内余下约0.5ml,冰冻玻片滴片,干燥。
7、染色:使用Giemsa染液染色3分钟。
8、阅片:油镜下计数100个中期相细胞,畸变细胞率