MTT试验中如何移除上清液

时间:2024-10-14 03:58:09

1、加DMSO前要把液体吸掉,但培养液里的紫色结晶可能会吸去,可在这之溱碳叛鹤前先用平板离心机离心96孔板,2000r,5分钟,然后吸掉上清(如果是悬浮细胞,则推荐此法,悬浮细胞要离心2500rpm×10min.且其做MTT最好用圆底型96孔板,清除上清时注意不要把下面的结晶颗粒吸掉,建议各孔吸弃150-160ul即可)。

2、MTT加入后,再孵育四个小时,然后用离心机离心1000G,5min。但是用枪小心地吸上清,还是会将一小部分蓝色结晶吸出。所以还是建议翻转倒扣的方法吧!

3、另外,可以直接将板翻转倒扣(垫几层滤纸)2-3鸱远忡绑次,比用“吸”的办法更不容易使细胞脱离出来。可以轻拍,或者倾斜一点帮助吸液,发现紫色结铐道樽虢晶几乎没有肉眼可见的掉脱,但前提是你本身细胞贴壁要比较牢,半贴壁生长的细胞容易脱离。假如药物作用时间长的话,阴性对照组可能由于细胞过多而使加入MTT后形成的结晶漂起来,这样就不能直接倒掉上清。

4、加完MTT反应3-4h后,从培养箱取出96孔板的动作要轻柔,避免振隘桎廾栖荡结晶,使其滑落.你可以试着将96孔板倾斜30度角,然后用枪尖慢慢吸,有的细胞可以用排枪一起吸,有的则要耐心的一个个用枪头吸,枪尖的力度和方向要保证每个孔都一致。不要让枪头接触到孔底,且一旦倾斜孔板后就不要反复倾斜放平,这样也会使结晶脱落。

5、用医用的注射器加上针头吸取液体的,吸取时要把板子斜放,沿着壁吸取就好了!这次MTT我用1ml针头仔细吸培养液,觉得比其它方法可靠,一般不会吸走紫色结晶.

© 手抄报圈